Qual a diferença entre eluição isocrática e por gradiente na CLAE?

Resposta

Isocrática: composição da fase móvel constante durante toda a corrida; Gradiente: composição da fase móvel varia ao longo do tempo.

Explicação:
Isocrática é indicada quando os analitos têm retenções semelhantes, oferece simplicidade e boa reprodutibilidade.
Gradiente aumenta progressivamente a fração do solvente orgânico em cromatografia reversa, permitindo eluir analitos com ampla faixa de polaridades em janelas de tempo menores, melhorar resolução e reduzir tempos de análise, lembrando que métodos em gradiente exigem reequilíbrio da coluna entre corridas para manter a reprodutibilidade.

Exemplo:
Analisar uma mistura contendo cafeína (mais polar) e colesterol (muito apolar) em coluna C18:
• Com isocrática, usando 50:50 água:acetonitrila, a cafeína elui cedo, o colesterol fica muito retido, causando picos largos e longa corrida.
• Com gradiente, iniciar em 30% acetonitrila e subir para 90% em 10 min, ambos os compostos eluem em tempos mais compactos, com picos bem definidos; após a corrida, reequilibrar a coluna por 5 min em 30% acetonitrila antes da próxima injeção.