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Qual etapa pós-amplificação é indispensável ao usar SYBR Green I para garantir a especificidade do ensaio?
Qual etapa pós-amplificação é indispensável ao usar SYBR Green I para garantir a especificidade do ensaio?
Resposta
A análise da curva de dissociação pós-amplificação é indispensável para confirmar a especificidade do ensaio.Realiza-se um aquecimento controlado enquanto se monitora a queda de fluorescência e a derivada dF/dT evidencia picos de temperatura de melting.
Os picos correspondem à Tm. Um pico único na Tm esperada indica produto específico. Picos múltiplos, ombros ou sinais em temperaturas muito baixas sugerem produtos inespecíficos ou primer-dímeros.
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