Questão FC298037
O exame de diagnóstico molecular usado para detectar a quantidade de material genético viral em uma amostra que, em função da pandemia de COVID-19, se popularizou muito no mundo no
Genética
IDECAN · 2021
O exame de diagnóstico molecular usado para detectar a quantidade de material genético viral em uma amostra que, em função da pandemia de COVID-19, se popularizou muito no mundo nos últimos dois anos foi o do método de RT-PCR.
A reação em cadeia da polimerase (PCR) é um método baseado no processo celular de duplicação de DNA. Esse método é considerado uma das grandes invenções da Ciência, sendo uma das técnicas mais realizadas em laboratórios de biologia molecular. A PCR é um método de síntese enzimática de fragmentos de DNA que inclui as etapas de desnaturação, anelamento e extensão (ou polimerização).
O método de RT-PCR é um exame de muito bom desempenho, já que ele tem alto índice de acerto ao diferenciar um paciente infectado do não-infectado e, por isso, é considerado o exame ideal para diagnóstico de covid-19. No entanto, esse método é uma variações da PCR que se caracteriza por:
- Utilizar inicialmente a enzima transcriptase reversa (RT, enzima de vírus de genomas de RNA) e como molde moléculas de RNA. A ação da enzima determina a síntese de molécula de DNA complementar (cDNA) ao RNA, que é então amplificado por PCR. Esse tipo de PCR permite a análise da expressão de genes por partir de moléculas de RNA mensageiro (RNAm).
- Aumentar a sensibilidade da PCR, porque utilizar dois pares de primers complementares à sequência alvo. Inicialmente é realizada a amplificação com o par mais externo e, posteriormente, o produto desta PCR é amplificado com um par interno ao primeiro (aninhado), que utilizará os fragmentos multiplicados na primeira reação como molde.
- Utilizar mais de um par de primers que promovem a amplificação de fragmentos de diferentes tamanhos em um mesmo tubo, ou seja, permitindo a amplificação de diferentes regiões em uma só reação.
- Utilizar além dos dois primers. que determinam a amplificação de uma dada região do DNA alvo, utilizar, também uma sonda complementar à região do DNA localizada entre os dois primers, contendo, em uma extremidade, uma molécula fluorescente (fluoróforo) e, na outra extremidade, uma molécula inibidora.
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Gabarito
A
Comentário do professor
A técnica RT-PCR inicia-se com a ação da transcriptase reversa sobre moléculas de RNA (modelo). Essa enzima sintetiza uma cópia de DNA complementar (cDNA) a partir do RNA, tornando possível o uso das reações enzimáticas próprias da PCR.
Após a síntese do cDNA, procede-se à amplificação por PCR convencional — ciclos de desnaturação, anelamento e extensão — para aumentar exponencialmente sequências específicas. A detecção do produto amplificado indica a presença do RNA-alvo na amostra.
Esse procedimento permite tanto a detecção de vírus com genoma de RNA, como o SARS-CoV-2, quanto a análise da expressão gênica a partir de RNA mensageiro, conferindo alta sensibilidade e especificidade diagnóstica.
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