Questão FC298041
Sobre as técnicas de sequenciamento de DNA, é correto afirmar que
Genética
IDECAN · 2023
Sobre as técnicas de sequenciamento de DNA, é correto afirmar que
- nas técnicas de sequenciamento de segunda geração não há utilização de eletroforese ou clonagem de DNA.
- uma das características dos sequenciamentos de primeira geração é o uso de fluoróforos ligados aos dNTPs.
- técnicas de terceira geração são menos propensas a erros e dispensa qualquer tipo de análise e validação posterior.
- sequenciamento de terceira geração também é chamado de sequenciamento de nova geração (next generation sequencing).
- a plataforma Illumina (Solexa) utiliza piro-sequenciamento, a qual se baseia na utilização da enzima luciferase.
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Gabarito
A
Comentário do professor
A afirmação está correta: as técnicas de segunda geração não empregam eletroforese nem requerem clonagem em vetores bacterianos para cada fragmento.
O fluxo típico envolve preparo de biblioteca com adaptores, seguido de amplificação em massa dos fragmentos diretamente em uma superfície sólida (clusters) ou em partículas/bolhas por emPCR, gerando cópias suficientes para leitura sem passagem por organismos hospedeiros.
A leitura é feita por métodos de sequenciamento por síntese ou técnicas de deteção química/óptica (por exemplo, Illumina com terminadores reversíveis e detecção por fluorescência, ou plataformas que medem sinais químicos), eliminando a necessidade de separação por tamanho por eletroforese.
Esse desenho permite alto rendimento e paralelização massiva, reduzindo tempo e manipulações em comparação com processos que exigem clonagem e corridas eletroforéticas.
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