Questão FC298045
A hibridização molecular é um método essencial na biologia molecular para detectar sequências específicas de ácidos nucleicos, sendo amplamente utilizada em diagnósticos genéticos
Genética
IDECAN · 2025
A hibridização molecular é um método essencial na biologia molecular para detectar sequências específicas de ácidos nucleicos, sendo amplamente utilizada em diagnósticos genéticos e detecção de agentes infecciosos. A eficiência dessa técnica depende de diversos fatores, incluindo condições experimentais e características da sonda utilizada. Acerca dos fatores que influenciam a especificidade e sensibilidade da hibridização molecular, assinale a alternativa correta.
- O comprimento da sonda e seu grau de complementaridade com o alvo são determinantes na estabilidade do pareamento, afetando diretamente a especificidade e a taxa de hibridização.
- A temperatura de hibridização pode ser arbitrariamente definida, pois a formação de pares de bases entre a sonda e o alvo ocorre independentemente das condições físicoquímicas do meio.
- O uso de sondas curtas aumenta a especificidade do ensaio, pois minimiza a ocorrência de pareamentos errôneos e reduz a interferência de sequências similares.
- A especificidade da hibridização molecular depende da força das interações hidrofóbicas entre os resíduos nitrogenados das bases púricas e pirimídicas.
- A presença de agentes desnaturantes, como formamida e ureia, não interfere na hibridização molecular, pois a estabilidade dos pares de bases é exclusivamente determinada pela composição GC da sequência alvo.
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Gabarito
A
Comentário do professor
A alternativa destaca corretamente que o comprimento da sonda e sua complementaridade com o alvo determinam a estabilidade do pareamento, influenciando diretamente a especificidade e a taxa de hibridização.
Quanto maior o número de bases pareadas e melhor a complementaridade, maior o Tm do duplex e mais estável será a interação, o que favorece a detecção (sensibilidade). Uma regra prática para oligonucleotídeos curtos é \(T_m \approx 4^\circ C \times \#(G/C) + 2^\circ C \times \#(A/T)\).
Por outro lado, mismatches reduzem a estabilidade e a velocidade de formação do duplex; trabalhando em temperatura próxima ao Tm (alta stringência) aumenta a discriminação entre sequências perfeitas e com erros.
Na prática busca-se um equilíbrio (por exemplo, 18–25 nt, %GC adequada) para otimizar sensibilidade sem perder especificidade.
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