Questão FC700375
Assinale a alternativa correta com relação aos ensaios moleculares de hibridização.
Bioquímica e Biomoléculas
VUNESP · 2025
Assinale a alternativa correta com relação aos ensaios moleculares de hibridização.
- No dot/blot uma ou múltiplas amostras são imobilizadas em uma membrana de nitrocelulose ou nylon, e a interpretação é relativamente simples. Uma limitação desse tipo de ensaio é que não pode ser quantitativo.
- As hibridizações Southern e Northern combinam uma separação eletroforética do ácido nucleico em teste à transferência para um suporte sólido e subsequente hibridização, o que permite determinar o peso molecular das amostras.
- Nos ensaios de hibridização em fase líquida, tanto a amostra quanto a sonda interagem em uma solução que maximiza a cinética da reação, mas esse formato não permite quantificar o produto da hibridização.
- Os ensaios de hibridização em fase sólida permitem uma grande gama de variações, todas com uma cinética mais rápida e uma maior extensão de reação do que aquelas que ocorrem nos meios líquidos.
- Os microarranjos podem ser considerados uma variação dos formatos Southern e Northern sendo aplicados apenas para detecção e quantificação de oligonucleotídeos, mas não para cDNA ou RNA.
Mostrar resposta e comentário
Gabarito
B
Comentário do professor
As técnicas Southern (DNA) e Northern (RNA) combinam três etapas essenciais: separação por eletroforese, transferência para uma membrana sólida (nitrocelulose ou nylon) e hibridização com uma sonda marcada.
No gel, os ácidos nucleicos são separados conforme o tamanho. Em seguida são transferidos para a membrana e imobilizados, o que preserva a ordem obtida na eletroforese e facilita a incubação com a sonda específica.
A detecção da sonda revela fragmentos que contêm a sequência-alvo. Como a amostra foi previamente separada por tamanho, comparar a posição das bandas com um marcador permite inferir o tamanho molecular dos fragmentos detectados (normalmente expresso em pares de bases).
Assim, a sequência de separação, transferência e hibridização é a razão pela qual esses blots possibilitam determinar o peso/tamanho molecular das amostras.
Conteúdo do catálogo FC Concursos · Atualizado em