Questão FC700460
Durante um experimento de clonagem gênica, um gene de interesse foi inserido em um vetor plasmidial que contém um gene de resistência à ampicilina e a sequência codificante da subu
Genética
VUNESP · 2025
Durante um experimento de clonagem gênica, um gene de interesse foi inserido em um vetor plasmidial que contém um gene de resistência à ampicilina e a sequência codificante da subunidade α da β-galactosidase (lacZ-α). Esse vetor foi utilizado para transformar cepas de Escherichia coli que expressam a subunidade complementar da enzima (lacZ-ω). As células transformadas foram cultivadas em meio LB suplementado com ampicilina e X-gal. Considerando o sistema de alfacomplementação utilizado nesse ensaio, um resultado que indica corretamente a presença de clones recombinantes apresenta colônias
- azuis, devido à manutenção da atividade da β-galactosidase.
- brancas, devido à interrupção do quadro de leitura da subunidade lacZ-α.
- azuis, devido à inserção do gene de interesse no sítio múltiplo de clonagem da região lacZ.
- brancas, devido à repressão da expressão do gene de resistência.
- azuis, devido à expressão aumentada do sistema lac em presença de X-gal.
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Gabarito
B
Comentário do professor
No sistema de alfacomplementação, a cepa fornece a lacZ-ω e o plasmídeo, a lacZ-α. O sítio múltiplo de clonagem fica dentro de lacZ-α.
Quando o gene de interesse é inserido nesse sítio ocorre a interrupção do quadro de leitura da lacZ-α, impedindo a síntese do peptídeo α funcional.
Sem o peptídeo α não há complementação com a ω e a β-galactosidase funcional não se forma. Como consequência, o substrato cromogênico X-gal não é clivado.
Assim, colônias que contêm plasmídeos com o inserto permanecem brancas em meio com ampicilina e X-gal. A cor branca indica, portanto, clones recombinantes.
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