Questão FC700503
Em relação às técnicas fundamentadas na amplificação de ácidos nucleicos utilizadas no diagnóstico em virologia, assinale a alternativa correta.
Microbiologia
VUNESP · 2025
Em relação às técnicas fundamentadas na amplificação de ácidos nucleicos utilizadas no diagnóstico em virologia, assinale a alternativa correta.
- A hibridização direta com sondas de DNA é amplamente utilizada nos laboratórios de diagnóstico, devido à sua alta sensibilidade para detecção de baixos níveis de ácidos nucleicos virais.
- A detecção por PCR em tempo real, utilizando SYBR Green®, permite diferenciar com precisão produtos específicos de amplificação por meio da análise da curva de dissociação (melting curve).
- A principal limitação da PCR convencional é a sua incapacidade de detectar produtos de amplificação múltiplos, tornando-a inadequada para testes multiplex.
- O método de sondas de hidrólise é assentado na hibridização de sondas de DNA marcadas com corantes fluorescentes que emitem luz apenas após a ligação covalente ao DNA viral.
- A amplificação isotérmica mediada por alça (LAMP) exige o uso de um termociclador devido à necessidade de ciclos de temperatura bem definidos.
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Gabarito
B
Comentário do professor
A alternativa correta descreve a aplicação do PCR em tempo real com SYBR Green. Esse corante se liga ao DNA dupla fita e emite fluorescência proporcional à quantidade total de produto dupla fita formada durante a amplificação.
Como o SYBR Green não distingue sequência, ele também marca produtos inespecíficos e dímeros de primer. Por isso é essencial avaliar a curva de dissociação (melting curve) ao final da corrida. A medida da fluorescência enquanto a temperatura aumenta revela a temperatura de melting de cada produto.
Na prática gera‑se um gráfico de derivada, \( -\frac{dF}{dT} \) versus temperatura, onde cada pico corresponde a um produto com sua Tm característica. Um único pico nítido indica produto específico; múltiplos picos ou picos baixos sugerem inespecificidade ou dímeros.
Essa análise permite diferenciar com precisão produtos específicos, aumentando a confiabilidade do resultado em ensaios com SYBR Green.
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