Questão FC700722
Assinale a alternativa que descreve corretamente uma característica essencial da etapa de captura de RNA na metodologia scRNA-seq.
Imunologia
VUNESP · 2025
Assinale a alternativa que descreve corretamente uma característica essencial da etapa de captura de RNA na metodologia scRNA-seq.
- O RNA é capturado utilizando esferas magnéticas revestidas com oligo-dT, que se ligam ao poli-A presente em mRNAs, permitindo a análise de RNA mensageiro.
- A captura de RNA é realizada exclusivamente por hibridização com sondas específicas para genes de interesse, eliminando a necessidade de amplificação posterior.
- A captura de RNA ocorre por filtração mecânica, separando RNAs de diferentes tamanhos antes da síntese de cDNA.
- A etapa de captura de RNA é realizada em alta temperatura para garantir a desnaturação completa de estruturas secundárias do RNA.
- A captura de RNA não é seletiva, incluindo todos os tipos de RNA (mRNA, rRNA e tRNA) para uma análise completa do transcriptoma.
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Gabarito
A
Comentário do professor
A alternativa descreve a etapa de captura de forma correta porque utiliza esferas magnéticas revestidas com oligo-dT que se hibridizam à cauda poli-A presente nos mRNAs, promovendo a captura seletiva dos transcritos codificadores de proteínas.
Após a ligação, as esferas permitem a separação física por campo magnético e lavagens que removem outros RNAs e contaminantes, resultando em enriquecimento do material desejado. O RNA capturado é então convertido em cDNA para amplificação e sequenciamento.
Em protocolos de scRNA-seq, os oligo-dT frequentemente carregam ainda barcodes de célula e UMIs, garantindo identificação individual e contagem molecular precisa a partir do pequeno conteúdo de RNA por célula.
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