Questão FC700732
Durante o desenvolvimento de uma vacina de subunidades, a preservação da conformação tridimensional da proteína antigênica recombinante é um requisito fundamental para garantir a e
Imunologia
VUNESP · 2025
Durante o desenvolvimento de uma vacina de subunidades, a preservação da conformação tridimensional da proteína antigênica recombinante é um requisito fundamental para garantir a exposição de epítopos conformacionais e, consequentemente, garantir a imunogenicidade. Considerando que a proteína foi expressa em vetores de Escherichia coli, qual abordagem proteômica seria adequada para avaliar se a estrutura se mantém semelhante à da proteína nativa?
- Quantificação da transcrição do gene codificante por meio de PCR quantitativo em tempo real, como marcador indireto da integridade estrutural da proteína.
- Detecção imunológica por Western blotting realizado sob condições desnaturantes, para análise da presença de epítopos lineares.
- Purificação da proteína por cromatografia de afinidade, utilizando anticorpos específicos, como indicativo da retenção de imunogenicidade funcional.
- Análise estrutural por espectrometria de massas, associada a técnicas como dicroísmo circular para avaliação da conformação secundária da proteína.
- Teste sorológico do tipo ELISA indireto, empregando amostras de soro humano, como inferência da reatividade antigênica do produto recombinante.
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Gabarito
D
Comentário do professor
A combinação de espectrometria de massas com dicroísmo circular oferece uma avaliação robusta da conformação da proteína recombinante.
Espectrometria de massas fornece massa intacta, mapeamento peptídico, identificação de modificações pós‑traducionais e heterogeneidade. Native MS, HDX‑MS e abordagens de cross‑linking mostram exposição de superfícies, interação entre domínios e estado oligomérico, dados cruciais para inferir preservação da estrutura terciária e disponibilidade de epítopos.
Dicroísmo circular quantifica conteúdo de estrutura secundária (hélice α, folha β). A comparação dos espectros entre a recombinante e a proteína nativa indica manutenção ou alteração do dobramento.
Juntas, essas técnicas complementares permitem concluir se a proteína expressa em E. coli mantém conformação semelhante à nativa e, por consequência, a exposição dos epítopos conformacionais.
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