Questão FC701056
O sequenciamento por si só não fornece informações sobre a abundância de anticorpos no plasma e nas secreções de mucosas, visto que a presença de um BCR (B-cell receptors) na perif
Sem classificação
VUNESP · 2025
O sequenciamento por si só não fornece informações sobre a abundância de anticorpos no plasma e nas secreções de mucosas, visto que a presença de um BCR (B-cell receptors) na periferia não garante sua existência como imunoglobulina secretada. Por outro lado, novas estratégias proteômicas estão fornecendo informações sem precedentes sobre as identidades, funções e alvos de anticorpos obtidos diretamente de doadores humanos com resolução de molécula única (single-molecule resolution). Sobre essas estratégias, assinale a alternativa incorreta.
- Os métodos proteômicos bottom-up (BU) permitem a identificação e a quantificação de centenas de linhagens de anticorpos diretamente de uma mistura policlonal.
- Nos métodos proteômicos bottom-up (BU), os anticorpos são digeridos enzimaticamente em peptídeos ionizáveis e analisados por cromatografia líquida (LC) acoplada com high-resolution tandem mass spectrometry (MS).
- Em contraste com a proteômica BU, as abordagens top-down (TD) dispensam a digestão de proteínas antes da análise por LC-MS/MS e, em vez disso, introduzem proteínas intactas no espectrômetro de massas.
- Uma tendência recente é usar uma abordagem middle-down (MD), na qual os anticorpos são digeridos em fragmentos de, aproximadamente, 50–100 kDa (Fab ou F(ab’)2), reduzindo assim a complexidade da amostra e melhorando a eficiência da separação de fragmentos individuais de anticorpos por LC.
- A abordagem BU para a análise do repertório de anticorpos humanos não supera o nível de sequência de resolução fornecido pelas técnicas proteômicas TD e MD.
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Gabarito
Errado
Comentário do professor
A afirmação é incorreta porque generaliza a comparação entre técnicas sem definir a métrica de "resolução de sequência".
Na prática, a abordagem bottom-up (BU) digere anticorpos em peptídeos, o que confere altíssima sensibilidade e grande cobertura de sequência em amostras complexas, permitindo identificar e quantificar muitas linhagens em nível peptídico.
Por outro lado, as abordagens top-down (TD) e middle-down (MD) preservam a continuidade da cadeia polipeptídica e caracterizam proteoformas intactas ou fragmentos grandes, oferecendo vantagem para distinguir variantes combinacionais e modificações que BU perde.
Portanto, não é correto afirmar categoricamente que BU "não supera" TD/MD: BU pode superar em profundidade e cobertura peptídica, enquanto TD/MD superam em resolução da molécula intacta.
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