Questão FC701058
Para realizar um levantamento abrangente do repertório celular, são necessárias técnicas de alto rendimento visando atingir a quantidade de sequenciamento necessária para uma amost
Sem classificação
VUNESP · 2025
Para realizar um levantamento abrangente do repertório celular, são necessárias técnicas de alto rendimento visando atingir a quantidade de sequenciamento necessária para uma amostragem representativa, a qual é normalmente na escala de 100.000 a 10.000.000 de células por experimento. Entre os últimos avanços nessa área, há o método conhecido como LIBRA-seq (linking BCR to antigen specificity through sequencing), o qual consiste em
- isolar células B ligadas a um painel de antígenos marcados com fluorescência e com código de barras usando citometria de fluxo, sendo que essas células são processadas e analisadas por Cryo-EM.
- isolar células B ligadas a um painel de antígenos marcados com fluorescência e com código de barras usando citometria de fluxo, sendo essas células então processadas para identificar suas sequências BCR em microplacas, seguida de sequenciamento pelo método Sanger.
- isolar células B ligadas a um painel de antígenos marcados com fluorescência e com código de barras usando imunocromatografia, seguida de sequenciamento de Sanger para identificar suas sequências BCR e uso de imunofluorescência para identificar os antígenos com código de barras ligados a cada célula.
- isolar células B ligadas a um painel de antígenos marcados com fluorescência e com código de barras usando citometria de fluxo, sendo essas células então processadas usando a plataforma 10X Genomics para identificar suas sequências BCR e os antígenos com código de barras ligados a cada célula.
- isolar células B ligadas a um painel de antígenos não marcados usando métodos de centrifugação, sendo essas células então processadas usando a plataforma 10X Genomics para identificar suas sequências BCR e os antígenos com código de barras ligados a cada célula.
Mostrar resposta e comentário
Gabarito
B
Comentário do professor
LIBRA-seq visa vincular a especificidade antigênica à sequência do receptor B ( BCR ). Para isso, um painel de antígenos é marcado com sinais fluorescentes e com codes de barras (oligonucleótidos identificadores) que permitem rastrear qual antígeno cada célula reconheceu.
Por meio de citometria de fluxo, selecionam-se e isolam-se as células B que exibem ligação aos antígenos marcados. A fluorescência permite detectar as células ligantes; o código de barras retém a identidade do antígeno ligado.
As células isoladas são depositadas em microplacas, onde se realiza a amplificação dos genes das cadeias pesada e leve do BCR por RT‑PCR. Em seguida, as amostras são sequenciadas por Sanger, obtendo as sequências de BCR.
Combinando a leitura dos códigos de barras dos antígenos com as sequências de BCR obtidas, o método estabelece quais sequências correspondem a quais especificidades antigênicas, possibilitando caracterizar o repertório funcional das células B.
Conteúdo do catálogo FC Concursos · Atualizado em