Questão FC701063
Um pesquisador, durante seus experimentos para obtenção de anticorpos monoclonais, conseguiu selecionar apenas os hibridomas advindos da fusão celular entre linfócitos B e mielomas
Sem classificação
VUNESP · 2025
Um pesquisador, durante seus experimentos para obtenção de anticorpos monoclonais, conseguiu selecionar apenas os hibridomas advindos da fusão celular entre linfócitos B e mielomas. Seu cultivo apresenta agora uma mistura de hibridomas, com anticorpos contra diferentes regiões do antígeno-alvo sendo produzidos em um mesmo poço. Entre os procedimentos a seguir, qual o pesquisador deve adotar para garantir que os anticorpos secretados sejam monoclonais e específicos?
- Extração de DNA genômica das células, seguida de digestão enzimática para análise pela técnica de pulsed-field gel electrophoresis.
- Diluição limitante das células, confirmação do número de células por poço e, após o crescimento celular, o sobrenadante obtido da cultura deve ser submetido a uma avaliação dos anticorpos presentes por meio do método imunoenzimático ELISA.
- Espectrometria de massa para identificação das proteínas produzidas pelas células e, com as sequencias obtidas, iniciar um novo ciclo de imunizações.
- Substituição do meio de cultura por PBS e monitoramento de morte celular até estar presente apenas uma célula por poço. Neste ponto, adicionar meio nutritivo para crescimento celular seguido de avaliação do sobrenadante por PCR.
- Imunocromatografia para identificação das regiões de ligação dos anticorpos e isolamento das células.
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Gabarito
B
Comentário do professor
A alternativa descreve o procedimento clássico para obter um anticorpo verdadeiramente monoclonal. A diluição limitante visa distribuir as células de modo que cada poço receba, preferencialmente, uma única célula, permitindo a formação de um clone único produtor de anticorpo.
É importante confirmar o número de células por poço (por observação em microscópio) para garantir que a clonagem foi bem-sucedida. Após expansão do clone, coleta-se o sobrenadante da cultura.
O sobrenadante deve ser testado por ELISA para verificar a presença e a especificidade do anticorpo secretado. Esse ensaio funcional confirma que o clone produz apenas uma população de anticorpos dirigida ao epítopo desejado, assegurando a monoclonalidade.
Para ajustar a diluição pode-se usar a estatística de Poisson: \(P(1)=\lambda e^{-\lambda}\), onde \(\lambda\) é a média de células por poço; isso orienta a escolha da concentração celular inicial.
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