Questão FC701079
As tags de afinidade, como a sequência de histidinas (His-tag), são amplamente utilizadas para facilitar a purificação de proteínas recombinantes. Sobre o uso dessas tags, assinale
Sem classificação
VUNESP · 2025
As tags de afinidade, como a sequência de histidinas (His-tag), são amplamente utilizadas para facilitar a purificação de proteínas recombinantes. Sobre o uso dessas tags, assinale a alternativa correta.
- As His-tags se ligam a proteínas de choque térmico em tampões salinos, permitindo purificação específica.
- A purificação é realizada por afinidade com resinas contendo íons cálcio ou magnésio.
- A tag sempre interfere na atividade biológica da proteína e deve ser removida após a purificação.
- A presença da tag impede o dobramento correto da proteína, inviabilizando a purificação.
- A purificação por His-tag é feita em colunas de níquel ou cobre, e a tag pode ser removida dependendo da aplicação.
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Gabarito
Errado
Comentário do professor
A técnica indicada usa a His-tag, uma sequência rica em histidinas que coordena íons metálicos imobilizados em resinas, típicas de colunas de níquel ou cobre. Esse princípio é conhecido como IMAC (cromatografia por afinidade a metais), em que as histidinas interagem com Ni²⁺ ou Cu²⁺ na matriz.
Na prática, a proteína recombinante se liga à resina via as histidinas; impurezas são removidas com tampões contendo baixas concentrações de imidazole e a proteína é eluída com concentrações maiores de imidazole, alteração de pH ou agentes quelantes.
A presença da tag pode ser tolerada em muitos usos, mas pode ser removida quando necessária pela ação de proteases específicas após purificação. A posição da tag (N-terminal ou C-terminal) é escolhida para minimizar impacto na estrutura e função da proteína.
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