Questão FC701531
No método de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para investigação de hemoglobinopatias, cada fração de hemoglobina é identificada com base
Sem classificação
VUNESP · 2025
No método de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para investigação de hemoglobinopatias, cada fração de hemoglobina é identificada com base
- no tamanho molecular das diferentes cadeias globínicas sendo mais rápidas na mobilidade quando comparada com a Hb A.
- no tempo de retenção característico de cada hemoglobina durante a passagem pela coluna.
- na diferença de mobilidade eletroforética em pH alcalino quando comparada com a Hb A.
- na mobilidade eletroforética e intensidade da coloração obtida após reação com azul cresil brilhante.
- na velocidade de migração das hemoglobinas em gel de poliacrilamida em pH ácido quando comparada com a Hb A.
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Gabarito
B
Comentário do professor
O método HPLC separa moléculas pela interação entre a amostra, a coluna (fase estacionária) e a fase móvel. Cada hemoglobina interage de modo distinto com a coluna, resultando em um tempo de retenção próprio para cada fração.
O equipamento registra um cromatograma onde cada pico aparece no instante correspondente ao seu tempo de retenção. A posição do pico identifica a hemoglobina; a área do pico permite estimar a quantidade relativa.
Esse princípio torna a identificação robusta quando são usados padrões de referência e controles, pois fatores como tipo de coluna, composição da fase móvel, fluxo e temperatura alteram os tempos de retenção e exigem calibração.
Portanto, a identificação das frações no HPLC baseia-se no tempo de retenção característico de cada hemoglobina durante a passagem pela coluna.
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