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Questão FC779489

A coloração de Gram é uma técnica diferencial clássica da microbiologia que permite distinguir bactérias observadas em microscopia óptica com base nas diferenças estruturais encont

Sem classificação

Instituto AOCP · 2026

A coloração de Gram é uma técnica diferencial clássica da microbiologia que permite distinguir bactérias observadas em microscopia óptica com base nas diferenças estruturais encontradas nos diferentes microrganismos. O protocolo consiste em uma série de etapas após a fixação do esfregaço na lâmina, cada uma delas seguida por enxágues com água destilada, conforme indicado a seguir:

 

1. coloração com cristal-violeta por aproximadamente 1 min;

 

2. coloração com solução de lugol (iodo) por aproximadamente 1 min;

 

3. lavagem com solventes orgânicos (etanol 95% ou etanol-acetona) por 10 a 20 s;

 

4. coloração com solução de safranina (ou fucsina) por 30 a 60 s.

 

Durante a realização desse protocolo com um material que sabidamente continha uma mistura de bactérias Gram-negativas e Gram-positivas, um técnico de laboratório deixou as lâminas que já haviam sido coradas com cristal-violeta e lugol, durante um tempo excessivo, mergulhadas na solução de etanol 95%, fazendo com que a etapa 3 do protocolo durasse cerca de 1 min. Entretanto, para não desperdiçar o material e o tempo de trabalho já realizado, decidiu continuar com a última etapa de coloração. Após o término das etapas do protocolo e secagem das lâminas, o técnico, ao observá-las no microscópio óptico, pode perceber que

  1. tanto as bactérias Gram-positivas quanto as Gram-negativas apresentaram coloração roxa intensa.
  2. as bactérias Gram-negativas apresentaram coloração verde e as Gram-positivas não foram coradas.
  3. tanto as bactérias Gram-positivas quanto as Gram-negativas apresentaram coloração rosada pálida.
  4. as bactérias Gram-positivas apresentaram coloração roxa intensa e as Gram-negativas não foram coradas.
  5. as bactérias Gram-positivas apresentaram coloração roxa intensa e as Gram-negativas apresentaram coloração rosada pálida.
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Gabarito

Certo

Comentário do professor

A coloração de Gram depende da retenção do complexo cristal-violeta associado ao lugol (iodo) nas células com paredes espessas de peptidoglicano. O passo crítico é a descoloração com etanol pelo tempo correto: remove o complexo nas bactérias Gram-negativas (parede fina e membrana externa) e o fixa nas Gram-positivas.

Quando o técnico deixou as lâminas tempo excessivo no etanol 95%, ocorreu descoloração excessiva, fazendo com que até as Gram-positivas perdessem o complexo corante-iodo. Na etapa final, a safranina corou todas as células.

Por isso, ao microscópio tanto as Gram-positivas quanto as Gram-negativas apareceram com coloração rosada pálida, resultado da perda do cristal-violeta e da posterior coloração pelo corante de contraste.

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