Questão FC867773
Durante a análise de vestígios biológicos por qPCR, o laboratório incluiu um controle negativo (sem DNA alvo) e observou fluorescência detectável apenas após o ciclo 38, próxima do
Genética
FGV · 2026
Durante a análise de vestígios biológicos por qPCR, o laboratório incluiu um controle negativo (sem DNA alvo) e observou fluorescência detectável apenas após o ciclo 38, próxima do limite de detecção do equipamento.
Assinale a opção que apresenta a explicação para esse resultado e a medida preventiva que deveria ser adotada, respectivamente.
- Indica que o DNA da amostra foi degradado; deve-se repetir a extração.
- Indica formação de dímeros de primers ou contaminação de baixo nível; deve-se otimizar os primers, adotar controle rigoroso de áreas e reagentes, e repetir a reação.
- Demonstra que a sonda TaqMan falhou; deve-se substituir todos os reagentes fluorescentes.
- Mostra que o DNA amplificado é de outra espécie; deve-se usar primers universais.
- Indica que o PCR convencional seria mais confiável; deve-se trocar a técnica imediatamente.
Mostrar resposta e comentário
Gabarito
B
Comentário do professor
Fluorescência detectável apenas após o ciclo 38, próximo ao limite do equipamento, sugere amplificação inespecífica ou sinal de contaminação muito baixa. Nesses casos é comum ocorrer formação de dímeros de primers ou presença de traços de DNA que só aparecem em ciclos tardios.
Como prevenção deve-se otimizar os primers: revisar desenho para evitar complementaridade 3', ajustar comprimento e Tm, testar concentração e usar hot-start quando possível. Verifique curva de dissociação para identificar dímeros.
Adote ainda controle rigoroso de áreas e reagentes: separar áreas pré e pós-amplificação, usar ponteiras filtrantes, aliquotar reagentes, limpar com soluções que degradam DNA e incluir controles negativos em todas as placas.
Por fim, repetir a reação confirma se o sinal é recorrente ou esporádico antes de interpretar resultado.
Conteúdo do catálogo FC Concursos · Atualizado em