Julgue o item a seguir, relativo à técnica de amplificação de DNA por PCR. A temperatura da etapa de extensão é ajustada de acordo com a temperatura de fusão dos primers.

Gabarito

Errado

Comentário do professor

A afirmação está errada. A temperatura da etapa de extensão (alongamento) é definida pela temperatura ótima da DNA polimerase utilizada (por exemplo, Taq ≈ 72°C). Nesta fase a enzima catalisa a síntese do novo filamento, portanto a temperatura busca maximizar sua atividade e estabilidade.

A temperatura de fusão (Tm) dos primers rege a etapa de anelamento, quando os primers se emparelham ao molde. O anelamento costuma ser programado cerca de 3–5°C abaixo da Tm para garantir especificidade e eficiência da ligação.

Além disso, o tempo de extensão depende do tamanho do amplicon (ex.: ≈1 kb/min para Taq) e algumas polimerases têm ótimos diferentes. Portanto, a extensão é ajustada conforme a enzima, não pela Tm dos primers, visando rendimento e especificidade.