Julgue o item a seguir, relativo à técnica de amplificação de DNA por PCR. A etapa de anelamento ocorre em temperaturas mais altas que a etapa de desnaturação.

Gabarito

Errado

Comentário do professor

A afirmativa está errada.

Na PCR a etapa de desnaturação ocorre em temperaturas altas, tipicamente ≈94–96 °C, para separar as duas fitas do DNA por quebra das ligações de hidrogénio.

O anelamento é a etapa em que os primers se ligam às fitas simples e ocorre em temperaturas mais baixas, geralmente ≈50–65 °C, dependentes do Tm dos primers. Uma regra prática para Tm de primers curtos é \(Tm \approx 2^\circ C\times(A+T)+4^\circ C\times(G+C)\). Normalmente o anelamento é ajustado cerca de 3–5 °C abaixo do Tm.

Após o anelamento vem a extensão, realizada pela Taq polimerase em ≈72 °C. Se o anelamento fosse a temperaturas maiores que a desnaturação, os primers não conseguiriam hibridizar e a amplificação não ocorreria corretamente.