Questão FC444723
Nas últimas décadas, vêm sendo progressivamente adotadas técnicas moleculares para o diagnóstico de doenças infecciosas, como a PCR. Devido à sua capacidade em detectar agentes inf
Genética
CEBRASPE (CESPE) · 2024
Nas últimas décadas, vêm sendo progressivamente adotadas técnicas moleculares para o diagnóstico de doenças infecciosas, como a PCR. Devido à sua capacidade em detectar agentes infecciosos com alta sensibilidade e especificidade, sem necessidade de se encontrar microrganismos viáveis na amostra biológica, a PCR tornou-se uma ferramenta valiosa e muito confiável para o diagnóstico e monitoramento de doenças.
Com pertinência a esse tema, julgue o item subsequente.
A PCR multiplex demanda o uso de uma Taq polimerase específica para cada alvo a ser amplificado.
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Gabarito
Errado
Comentário do professor
A afirmação está errada. Não é preciso uma Taq polimerase diferente para cada alvo na PCR multiplex: uma única enzima termoestável basta para amplificar múltiplos fragmentos na mesma reação.
O ponto crucial na multiplex é o projeto e a otimização dos primers: eles devem ser específicos para cada alvo, ter temperaturas de anelamento compatíveis e evitar complementaridade entre si, o que previne formação de dimers e produtos inespecíficos.
Além disso, a multiplex exige ajustes na concentração de primers, no teor de Mg2+ e no protocolo térmico. Em muitos casos emprega-se Taq com características particulares (por exemplo, hot-start) para melhorar desempenho, mas isso não significa enzimas distintas para cada alvo.
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