Questão FC445744
Isolado/Linhagem fúngica Estratégia empregada Rendimento do bioinsumo secretado (mg/kg/h)(1) Selvagem Microbiologia: Isolamento em meio de cultura seletivo 980 Mutante 1 Modificaçã
Biotecnologia
CEBRASPE (CESPE) · 2025
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Isolado/Linhagem fúngica |
Estratégia empregada |
Rendimento do bioinsumo secretado (mg/kg/h)(1) |
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Selvagem |
Microbiologia: Isolamento em meio de cultura seletivo |
980 |
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Mutante 1 |
Modificação genética por irradiação UV |
4.000 |
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Mutante 2 |
Transgenia em linhagem auxotrófica(2) |
6.000 |
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Mutante 3 |
Edição gênica por sistema CRISPR-Cas(3) |
2.000 |
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Mutante 1 + Selvagem |
Microbiologia: Cocultivo |
6.500 |
(1) Miligrama de bioinsumo produzido em 1 h por kg de massa fúngica úmida.
(2) Gene heterólogo e gene marcador de seleção para via metabólica essencial.
(3) Deleção de sítio alostérico em enzima alvo de retroalimentação negativa.
Partindo das informações apresentadas na tabela acima e considerando os conhecimentos acerca do desenvolvimento e da aplicação de bioinsumos, julgue o item a seguir.
O sistema CRISPR-cas utilizando-se apenas RNAs sintéticos, associado ao cultivo de célula única, possibilita a geração de mutantes, como a mutante 3, sem a permanência de elementos transgênicos.
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Gabarito
Certo
Comentário do professor
Correto. O sistema CRISPR‑Cas pode gerar mutantes sem deixar elementos transgênicos permanentes quando a edição é feita de forma transiente.
Na prática isso ocorre ao introduzir o complexo proteico Cas associado a RNAs sintéticos (ou Cas em forma de mRNA mais gRNA sintético), evitando o uso de vetores de DNA. A atividade do complexo causa quebras direcionadas e reparos por NHEJ ou recombinação que podem levar à deleção do sítio alostérico descrito para a mutante 3.
O cultivo de célula única permite isolar clones homozigotos e não‑mosaic, facilitando a seleção de linhagens sem sequência exógena.
É preciso confirmar a ausência de DNA estranho por sequenciamento e testes de triagem, mas o fluxo descrito possibilita mutantes não transgênicos.
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