Questão FC445851
Uma proteína específica presente em uma solução que contém uma mistura de cinco proteínas foi analisada com o objetivo de se caracterizar a massa molecular, o ponto isoelétrico, a
Biotecnologia
CEBRASPE (CESPE) · 2024
Uma proteína específica presente em uma solução que contém uma mistura de cinco proteínas foi analisada com o objetivo de se caracterizar a massa molecular, o ponto isoelétrico, a composição de aminoácidos e a sequência de aminoácidos dessa proteína. O sequenciamento deve determinar pelo menos 30% da estrutura primária. O método de separação e análise utilizado para atingir tal objetivo permitiu o isolamento da proteína de interesse, separando-a das outras quatro proteínas, além de sua visualização por meio de marcação com prata e uma estimativa de sua massa molecular. A amostra contendo a proteína isolada por esse método foi dividida em alíquotas, denominadas I, II e III.
Acerca dessa situação hipotética, julgue o item a seguir.
Se a alíquota I for hidrolisada em ácido clorídrico para rompimento de todas as ligações peptídicas, seguida por marcação com fluoróforo e análise cromatográfica, então a análise dos resultados desse procedimento permitirá a determinação da composição de aminoácidos da proteína de interesse.
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Gabarito
Certo
Comentário do professor
Hidrólise ácida com HCl rompe as ligações peptídicas, convertendo a proteína em aminoácidos livres. Esse tratamento permite que cada resíduo seja analisado individualmente.
Após a hidrólise, a marcação com fluoróforo torna os aminoácidos detectáveis em baixos limites, melhorando sensibilidade e sinal na etapa seguinte.
Na cromatografia (ex.: HPLC), os aminoácidos marcados são separados e quantificados conforme suas propriedades físico-químicas, fornecendo a composição de aminoácidos da proteína (proporção e identidade dos resíduos).
Importante: como as ligações peptídicas foram rompidas, perde-se informação da ordem dos resíduos, portanto não é possível determinar a sequência primária pela análise da alíquota I. Além disso, alguns aminoácidos podem sofrer degradação parcial durante a hidrólise, exigindo cuidados experimentais.
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