Questão FC445852
Uma proteína específica presente em uma solução que contém uma mistura de cinco proteínas foi analisada com o objetivo de se caracterizar a massa molecular, o ponto isoelétrico, a
Biotecnologia
CEBRASPE (CESPE) · 2024
Uma proteína específica presente em uma solução que contém uma mistura de cinco proteínas foi analisada com o objetivo de se caracterizar a massa molecular, o ponto isoelétrico, a composição de aminoácidos e a sequência de aminoácidos dessa proteína. O sequenciamento deve determinar pelo menos 30% da estrutura primária. O método de separação e análise utilizado para atingir tal objetivo permitiu o isolamento da proteína de interesse, separando-a das outras quatro proteínas, além de sua visualização por meio de marcação com prata e uma estimativa de sua massa molecular. A amostra contendo a proteína isolada por esse método foi dividida em alíquotas, denominadas I, II e III.
Acerca dessa situação hipotética, julgue o item a seguir.
Considere-se que a alíquota III teve a proteína clivada por ação da tripsina e que os peptídeos resultantes foram aplicados em um sistema que permitiu sua separação cromatográfica seguida por aplicação em sistema de ionização por eletropulverização, análise em quadrupolos, fragmentação, análise dos fragmentos em quadrupolos e detecção dos componentes ionizados. Nesse caso, o método de análise após a separação cromatográfica é denominadoespectrometria de massa por dessorção a laser e análise por tempo de voo.
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Gabarito
Errado
Comentário do professor
A afirmação está ERRADA. O conjunto de etapas descritas caracteriza a técnica de espectrometria de massas por ionização por eletropulverização acoplada a espectrometria de massas em tandem (ESI‑MS/MS).
Após digestão por tripsina, os peptídeos são separados por cromatografia líquida e submetidos à ionização por eletropulverização, que gera principalmente íons policarregados adequados à análise em quadrupolos. A sequência de seleção, fragmentação (por exemplo por CID) e análise dos fragmentos nos quadrupolos corresponde a uma análise MS/MS, fundamental para determinar a sequência de peptídeos.
Esse fluxo (LC + ESI + quadrupolo + fragmentação + análise de fragmentos) é o método apropriado para obter cobertura de sequência primária de peptídeos digeridos por tripsina e justificar a alternativa marcada como correta.
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