Questão FC446472
Em um laboratório de bioquímica e biologia molecular de plantas, é necessário fracionar proteínas de um extrato obtido a partir de folhas. O protocolo inclui uma etapa de precipita
Química
CEBRASPE (CESPE) · 2025
Em um laboratório de bioquímica e biologia molecular de plantas, é necessário fracionar proteínas de um extrato obtido a partir de folhas. O protocolo inclui uma etapa de precipitação fracionada de proteínas com sulfato de amônio, seguido por centrifugação a 15.000 g por 30 minutos com o uso de uma centrífuga refrigerada. Após a centrifugação, o pellet (fração insolúvel) deve ser ressolubilizado em um tampão específico para análise posterior. Além disso, um conjunto separado de amostras contendo compostos termoestáveis será seco em uma estufa a 60 °C. Durante todo o processo, os equipamentos utilizados devem ser manuseados, limpos e mantidos adequadamente para garantir a qualidade das análises e evitar falhas.
A partir da situação hipotética anterior, julgue o item a seguir.
A precipitação de proteínas com sulfato de amônio, conforme indicado pelo protocolo em questão, é um método adequado para fracionar proteínas do extrato, uma vez que permite separá-las com base em sua solubilidade.
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Gabarito
Certo
Comentário do professor
A precipitação com sulfato de amônio é um método clássico e apropriado para fracionar proteínas porque explora diferenças na solubilidade das proteínas ao alterar a força iônica da solução. Ao aumentar gradualmente a concentração de sulfato de amônio ocorre o fenômeno conhecido como salting out, em que proteínas menos solúveis precipitam em concentrações menores e proteínas mais hidrofóbicas ou maiores precipitam em concentrações mais altas.
Essa estratégia permite obter frações enriquecidas por faixas de saturação (% de saturação do sal), seguida de centrifugação para coletar o pellet. As proteínas precipitados podem ser recuperadas por ressolubilização em tampões adequados e o excesso de sal removido por diálise ou cromatografia de gel, preservando a atividade e facilitando análises subsequentes.
Temperatura controlada e adição lenta do sal são importantes para maximizar rendimento e manter conformação proteica, justificando o uso dessa técnica no protocolo descrito.
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