Questão FC446500
Um projeto de pesquisa visa à extração e à purificação de uma enzima com atividade proteolítica a partir de 20 kg de um extrato vegetal, de forma a preservar a atividade enzimática
Química
CEBRASPE (CESPE) · 2025
Um projeto de pesquisa visa à extração e à purificação de uma enzima com atividade proteolítica a partir de 20 kg de um extrato vegetal, de forma a preservar a atividade enzimática até o final do processo, pois a enzima se desnatura facilmente. Espera-se, com isso, extrair cerca de 20 microgramas da enzima purificada e ativa em cada lote de material processado, que tenha sido considerado material suficiente para posteriores caracterizações estruturais e funcionais da enzima.
Considerando essa situação hipotética, julgue o item a seguir.
Se for usada a precipitação com sulfato de amônio seguida por uma etapa cromatográfica em fase reversa, a concentração final de sal da precipitação deve ser mantida constante até o final da cromatografia.
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Gabarito
Errado
Comentário do professor
A afirmação está errada. Após precipitação com sulfato de amônio não se deve manter a elevada concentração salina para injetar diretamente em cromatografia de fase reversa.
A fase reversa usa uma fase estacionária apolar e misturas orgânicas na fase móvel (ex.: acetonitrila/água). Sais inorgânicos precipitam em presença de solventes orgânicos, podendo obstruir a coluna, aumentar pressão e danificar a fase estacionária.
Além disso, o alto teor salino altera interações hidrofóbicas e pode comprometer a retenção e a atividade enzimática.
Portanto, realize dessalinização (diálise, troca de tampão por ultrafiltração ou gel-filtração) antes da fase reversa, preservando atividade e integridade da coluna.
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