Questão FC446502
Um projeto de pesquisa visa à extração e à purificação de uma enzima com atividade proteolítica a partir de 20 kg de um extrato vegetal, de forma a preservar a atividade enzimática
Química
CEBRASPE (CESPE) · 2025
Um projeto de pesquisa visa à extração e à purificação de uma enzima com atividade proteolítica a partir de 20 kg de um extrato vegetal, de forma a preservar a atividade enzimática até o final do processo, pois a enzima se desnatura facilmente. Espera-se, com isso, extrair cerca de 20 microgramas da enzima purificada e ativa em cada lote de material processado, que tenha sido considerado material suficiente para posteriores caracterizações estruturais e funcionais da enzima.
Considerando essa situação hipotética, julgue o item a seguir.
Se for usada cromatografia de exclusão molecular, deve-se separar o extrato da resina por centrifugação branda, mantendo-se a fração ativa no sobrenadante.
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Gabarito
Errado
Comentário do professor
Errado. A cromatografia de exclusão molecular funciona aplicando a amostra sobre uma coluna com resina e coletando frações eluídas conforme o tamanho das moléculas; não se separa resina e extrato por centrifugação mantendo a atividade no sobrenadante.
Para processar grandes volumes (20 kg) é necessário primeiro concentrar e clarificar a fração proteica, por exemplo por precipitação (sulfato de amônio) seguida de centrifugação. Após centrifugar, as proteínas sedimentam no corpo de fundo (pellet) e não no sobrenadante.
Esse pellet é ressuspenso, clarificado (filtração/centri) e então aplicado à coluna de exclusão molecular, que eluirá a enzima conforme seu tamanho. Durante todo o processo deve-se manter baixa temperatura, pH adequado e inibidores de protease para preservar a atividade enzimática.
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