Questão FC446509
Um projeto de pesquisa visa à extração e à purificação de uma enzima com atividade proteolítica a partir de 20 kg de um extrato vegetal, de forma a preservar a atividade enzimática
Química
CEBRASPE (CESPE) · 2025
Um projeto de pesquisa visa à extração e à purificação de uma enzima com atividade proteolítica a partir de 20 kg de um extrato vegetal, de forma a preservar a atividade enzimática até o final do processo, pois a enzima se desnatura facilmente. Espera-se, com isso, extrair cerca de 20 microgramas da enzima purificada e ativa em cada lote de material processado, que tenha sido considerado material suficiente para posteriores caracterizações estruturais e funcionais da enzima.
Considerando essa situação hipotética, julgue o item a seguir.
O uso de eletroforese em gel de poliacrilamida e dodecil sulfato de sódio é adequado à purificação desejada.
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Gabarito
Errado
Comentário do professor
Resposta ERRADO. A eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) não é adequada quando é preciso manter a atividade enzimática.
O SDS é um detergente aniônico que se liga às proteínas, promove desnaturação e confere carga negativa uniforme, abolindo a conformação nativa necessária para atividade catalítica. Além disso, amostras são normalmente aquecidas e tratadas com agentes redutores, procedimentos que também inativam enzimas.
Adicionalmente, o SDS-PAGE é essencialmente uma técnica analítica, pouco prática para purificação preparativa de quantidades recuperáveis de proteína ativa.
Para preservar atividade use técnicas não desnaturantes, por exemplo PAGE nativa ou métodos cromatográficos (afinidade, troca iônica, filtração por gel) que permitem recuperação da enzima em sua forma funcional.
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