Questão FC446517
Um técnico de laboratório de bioquímica foi encarregado de realizar uma série de análises envolvendo a determinação da concentração de proteínas em amostras biológicas aplicando o
Química
CEBRASPE (CESPE) · 2025
Um técnico de laboratório de bioquímica foi encarregado de realizar uma série de análises envolvendo a determinação da concentração de proteínas em amostras biológicas aplicando o método de Bradford. Para isso, ele utilizou uma solução padrão de albumina bovina (BSA) para a curva de calibração, e vidrarias como pipetas graduadas, béqueres e cubetas de quartzo para o espectrofotômetro. Durante os procedimentos, notou que os resultados apresentaram variações inesperadas entre leituras consecutivas da mesma amostra e entre replicatas. Ao revisar o método de preparo de amostras, percebeu que algumas pipetas apresentavam resíduos das mesmas soluções, utilizadas anteriormente; que as cubetas de quartzo estavam parcialmente opacas devido a arranhões; e que o tempo de uso da lâmpada do espectrofotômetro havia ultrapassado em 2 anos o limite previsto pelo fabricante.
Tendo a situação hipotética apresentada como referência, julgue o item a seguir.
As variações inesperadas tanto entre replicatas quanto entre leituras da mesma replicata podem ser consequência de uma homogeneização inadequada durante o preparo da solução padrão de BSA.
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Gabarito
Certo
Comentário do professor
A afirmação está correta porque a qualidade da curva-padrão depende diretamente da uniformidade das soluções de BSA. Uma homogeneização inadequada gera gradientes de concentração na solução padrão, de modo que alíquotas retiradas em momentos ou locais diferentes contêm quantidades distintas de proteína.
No método de Bradford o sinal ótico (absorbância) é proporcional à quantidade de proteína ligada ao reagente; portanto, variações na concentração da padrão provocam diferenças de absorbância entre leituras consecutivas e entre replicatas da mesma amostra. Agregação parcial ou dissolução incompleta da BSA e pipetagem de frações não representativas agravam esse efeito.
Para evitar, use frascos volumétricos, misture por inversão ou vortex até homogeneizar, aguarde completa dissolução e retire alíquotas bem misturadas. Assim a curva terá pontos consistentes e as replicatas, reprodutíveis.
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