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- Órgãos: UPE - Universidade de Pernambuco - Cargos: Assistente Técnico em Gestão Universitária (UPE) · IAUPE · 2026
No diagnóstico de doenças de plantas, a quantificação e avaliação de pureza do DNA de fitopatógenos são etapas cruciais antes de prosseguir com reações de PCR. A análise é feita me
No diagnóstico de doenças de plantas, a quantificação e avaliação de pureza do DNA de fitopatógenos são etapas cruciais antes de prosseguir com reações de PCR. A análise é feita medindo a absorbância em espectrofotômetro de microvolume. Com base nessa técnica, assinale a alternativa CORRETA.
- Para quantificar DNA de fita dupla, avalia-se a absorbância de 280nm, considerando que uma absorbância de 1,0 equivale a uma concentração de 50ng/µL.
- Uma razão de absorbância de A260/A280 entre 1,8 e 2,0 indica uma amostra de DNA puro, livre de contaminações significativas por proteínas.
- O padrão de referência utilizado para a leitura da concentração de DNA é em 230nm, pois o material genético absorve luz fortemente nessa faixa do ultravioleta.
- Se a razão A260/A280 for muito inferior a 1,6, isso é um indicativo característico de alta pureza do DNA e total ausência de impurezas como polissacarídeos ou sais.
- A espectrofotometria por absorbância UV permite quantificar o DNA independentemente da presença de RNA, visto que ambos exibem picos de absorbância em comprimentos de onda distintos.
Gabarito
Gabarito: B
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Comentário do professor
Princípio: ácidos nucleicos absorvem luz em 260 nm e proteínas em 280 nm. A relação entre essas leituras é expressa por \(A_{260}/A_{280}\).
Interpretação: um valor de \(A_{260}/A_{280}\) entre 1,8 e 2,0 indica DNA puro, ou seja, sem contaminação proteica significativa. Essa pureza é importante porque proteínas ou fenóis podem inibir enzimas utilizadas em reações como a PCR, comprometendo resultados.
Prática: em espectrofotometria de microvolume essa razão serve como controle de qualidade rápido antes de prosseguir com análises moleculares. Valores expressivamente menores sugerem contaminação por proteínas/compostos aromáticos; valores muito maiores podem apontar presença de RNA ou outros solutos.