- Questão:
- FC905830
- Conteúdo:
- Sem classificação
- Concurso:
- Órgãos: UPE - Universidade de Pernambuco - Cargos: Assistente Técnico em Gestão Universitária (UPE) · IAUPE · 2026
Ao utilizar o corante intercalante SYBR Green I para detectar um fungo fitopatogênico, qual etapa adicional é indispensável após a amplificação para garantir a especificidade do en
Ao utilizar o corante intercalante SYBR Green I para detectar um fungo fitopatogênico, qual etapa adicional é indispensável após a amplificação para garantir a especificidade do ensaio?
- Centrifugação da placa a 15.000 rpm para sedimentar impurezas vegetais.
- Análise da curva de dissociação (Melting Curve).
- Incubação a 4°C por 24 horas para estabilizar a fluorescência.
- Eletroforese em gel de poliacrilamida com nitrato de prata.
- Adição de novos primers durante a fase de platô.
Gabarito
Gabarito: B
Conteúdo do catálogo FC Concursos · Atualizado em
Comentário do professor
Ao usar SYBR Green I, que se liga a qualquer DNA de fita dupla, a etapa indispensável após a amplificação é a análise da curva de dissociação. Isso porque o corante não distingue produto alvo de produtos inespecíficos ou primer-dímeros.
Na prática, realiza-se um aquecimento controlado pós-PCR enquanto se monitora a queda de fluorescência. O resultado é uma curva cuja derivada (-dF/dT) evidencia picos de temperatura de melting (Tm).
Um pico único e bem definido na Tm esperada indica produto específico. Picos múltiplos, ombros ou sinais em temperaturas muito baixas sugerem produtos inespecíficos ou dímeros.
Portanto, a curva de dissociação confirma a especificidade do ensaio e reduz risco de falso positivo em diagnósticos de fungos fitopatogênicos; comparar com controle positivo e Tm teórico reforça a confiança.